Contagem de Reticulócitos e Plaquetas - Técnicas

CONTAGEM DE RETICULÓCITOS



Os reticulócitos são os precursores dos eritrócitos. Contêm no seu interior, restos de material reticular que não apresenta afinidade por um corante comum, sendo que sua visualização somente é possível com corantes supra vitais como é o caso do azul de cresil brilhante.

Material
1. Tubo de ensaio;
2. Lâminas de microscopia;
3. Conta-gotas ou tubo capilar;
4. Banho-Maria a 37 C;
5. Microscópio;
6. Óleo para imersão.

Corante
Azul de cresil brilhante................................................. 1,0g
Citrato de Sódio............................................................ 0,4g
Cloreto de Sódio 0,85% em água q.s.p......................... 100,0 ml

Procedimento
1. No tubo de hemólise colocar duas a 3 gotas da solução corante. Em seguida acrescentar 2 a 3 gotas do sangue colhido por punção venosa com anticoagulante.
2. Misturar e colocar em banho-maria durante 20 minutos.
3. Retirar do banho-maria. Misturar novamente e fazer esfregaços da maneira usual.
4. Secar e examinar ao microscópio sob imersão.
5. Contar mil hemácias, em vários campos microscópicos, anotando o número de reticulócitos encontrados. Expressar o resultado em porcentagem.

Cálculos

Reticulócitos por 1000 hemácias = % de reticulócitos
10

ou

% de Reticulócitos x Hm/mm3 = reticulócito/mm3 de sangue
100

Valores normais
No adulto.............................0,5 a 1,5% ou 25.000 a 75.000/mm3 sangue

Obs: estes valores aparecem discretamente aumentados na gravidez e em recém-nascidos.

Contagem de reticulócitos corrigida
Um paciente com um determinado grau de anemia deve ter a sua contagem de reticulócitos corrigida para que se determine o número de reticulócitos de acordo com o grau de anemia, o que muitas vezes mostra que uma contagem de reticulócitos normal pode estar tendo uma representatividade baixa para o paciente. Veja a técnica e um exemplo:

Porcentagem de reticulócitos x hct do paciente
Hct normal

Sabendo que um hematócrito considerado normal tem valor igual a 45% que representa a porcentagem da parte sólida do sangue e supondo que na contagem convencional a porcentagem de reticulócitos deste paciente tenha dado 1,2% e seu hematócrito 29:

Índice de reticulócitos = 1,2 x 29 = 0,77
45

O que parecia uma contagem normal igual a 1,2% de reticulócitos passou a ser uma contagem abaixo do normal.


A CONTAGEM DE RETICULÓCITOS É O MÉTODO MAIS SIMPLES PARA ESTUDO DA FUNÇÃO ERITROPOÉTICA

CAUSAS DE RETICULOCITOSES

1. Esferocitose
2. Drepanocitose
3. Eritroblastose Fetal
4. Anemia aguda pós-hemorrágica
5. Anemia hemolítica autoimune adquirida
6. Hemoglobinúria Paroxística noturna
7. Resposta terapêutica satisfatória nas anemias carenciais

CAUSAS DE RETICULOPENIAS

1. Anemia Aplástica
2. Crise aplástica de anemia hemolítica
3. Anemias Megaloblásticas

A Reticulocitose é um bom índice da resposta terapêutica das anemias por carência de fatores hematopoéticos.
Uma anemia ferropriva responde à administração de ferro com reticulocitose até a sua inteira correção.
Reticulocitose na ausência de perdas sanguíneas ou tratamento de estados carenciais com ferro, folatos ou vitamina B12 é bastante indicativo de hemólise.


CONTAGEM DE PLAQUETAS


Devido ao seu pequeno tamanho, sua tendência em aderir a superfícies estranhas ao endotélio vascular e sua rápida desintegração, a contagem de plaquetas torna-se problemática por qualquer método. A exatidão nas contagens requer experiência e cuidadosa atenção aos detalhes.
As plaquetas são contadas por métodos diretos e indiretos. Nos métodos diretos elas são visualizadas em uma diluição de sangue e contadas na câmara de Neubauer através da microscopia ótica comum. Um método direto bastante usado e aconselhado é o método de Rees-Ecker.

Método de Ress-Ecker

No sangue convenientemente diluído, as plaquetas são contadas por microscopia ótica comum, na câmara de Neubauer.

Material
1. Material para punção digital ou venosa
2. Micropipeta de 0,02 ml
3. Câmara de Neubauer
4. Papel de filtro ou algodão
5. Placa de Petri.

Solução diluidora:

Citrato de Sódio.................................................................3,8 g
Formol a 40%.....................................................................2,0 ml
Azul de cresil brilhante......................................................0,05 g
Água destilada.....................................................................100,0 ml

Procedimento:
1. Pipetar 4,0 ml da solução diluidora em um tubo de ensaio médio;
2. Com a micropipeta adicionar ao líquido diluidor 0,02 ml de sangue em EDTA limpando a parede externa da ponteira com papel absorvente ou algodão e lavando a ponteira dentro do líquido;
3. Agitar por inversão 2 minutos no mínimo;
4. Encher os retículos da câmara de Neubauer;
5. Sedimentar as plaquetas, repousando a preparação por 15 minutos em uma placa de Petri, contendo pedaços de algodão umedecido em água (câmara úmida) e em local isento de vibrações;
6. Fazer a contagem microscópica com aumento de 400 x em 1/5 de mm2, conforme indicado para as hemácias. É necessária experiência e atenção para distinguir as plaquetas de sujidades. As plaquetas aparecem como corpos ovais ou alongados, altamente refringentes, com 1 a 5 microns de diâmetro. O ajuste do contraste na microscopia é indispensável para uma boa visualização das plaquetas.

Cálculos:

Plaquetas por mm3 de sangue = Pc x 5 x 10 x 200, ou seja, número de plaquetas contadas em 1/5 de mm2 x 10.000.

Pc = plaquetas contadas.

Quanto maior o número de plaquetas contadas menor será o erro. Pode ser desejável e indicado contar as plaquetas em todos os vinte e cinco quadradinhos do retículo central, quando o fator final de multiplicação será 2.000.

Valores normais:
Várias são as biografias encontradas com valores de referência para contagem de plaquetas. Dando atenção à todas, adotaremos um valor como nosso valor normal ou de referência entre;
150.00 e 400.000/mm3 de sangue

Interpretação:
Os megacariócitos, células gigantes da medula óssea, são os precursores das plaquetas circulantes. O número total destas células na medula óssea é de 130 a 190 milhões. Cada uma destas células se fragmenta formando em torno de 16.000 plaquetas que permanecem em circulação por quatro a seis dias. Doze a 20% do seu número total é renovado diariamente.
Apresenta interesse clínico a relação entre megacariócito na medula óssea e plaquetas no sangue periférico. A hiperplasia na medula resulta em trombocitose (aumento do número de plaquetas) no sangue periférico.
Algumas patologias de medula ou propriamente orgânicas levam à queda do número total de plaquetas que deve urgentemente ser detectada pelo laboratório e informada ao médico para que se corrija o quanto antes esta deficiência, afim de que se contenha uma possível hemorragia e outras patologias oriundas da deficiência do número de plaquetas.
No processo de hemostasia, as plaquetas apresentam três funções principais: agregação e formação do tampão hemostático, atividades tromboplásticas através de fatores plaquetários e retração do coágulo.
Exames pré-operatórios como retração do coágulo, tempo de sangramento e outros, visam avaliar a quantidade e qualidade das plaquetas como veremos no decorrer do nosso curso.

Causas de trombocitose:
· Hemorragias;
· Fraturas ósseas;
· Transfusão de sangue;
· Hemólise;
· Infecção aguda: febre reumática, mononucleose infecciosa, e septicemia;
· Policitemia Vera;
· Leucemia mielóide;
· Doença de Hodgkin;
· Caquexia;
· Cardiopatias com dispnéia;
· Metaplasia mielóide
· Esplenectomia por destruição ineficiente.

Causas de trombocitopenia:
· Infecções agudas: Pneumonia e malária;
· Carencial: escorbuto;
· Tóxicas: cloranfenicol, fenilbutazona, salicilatos, sulfonamidas e benzeno;
· Radiações: Raios-X e radium;
· Mielopática: anemia perniciosa e aplástica, plasmocitomia, infiltração metastática;
· Alérgica: iodo, quinina e beladona;
· Lupus eritematoso.